cakrawala

Proliferasi Sel Punca Mesenkimal dalam Scaffold Karbonat Apatit-kitosan

Kebutuhan akan perbaikan tulang telah meningkat dengan meningkatnya usia harapan hidup. Kerusakan tulang yang disebabkan oleh pencabutan gigi, trauma, dan kondisi patologis lainnya memiliki keterbatasan dalam perbaikan tulang spontan. Dalam hal ini, strategi untuk memperbaiki cacat tulang termasuk autografts, allografts dan xenografts. Autografts telah menjadi pilihan ideal untuk mengisi kerusakan tulang. Metode ini memiliki beberapa kelemahan signifikan yang dapat menyebabkan komplikasi dalam proses penyembuhan, memerlukan tindakan bedah tambahan, menyebabkan rasa sakit pada donor dan terbatasnya pasokan donor tulang. Di sisi lain, allografts dan xenografts memiliki risiko reaksi imunogenik dan penularan penyakit dari cairan dan jaringan donor. Dengan kelemahan ini, mendorong peningkatan penggunaan bahan cangkok tulang alternatif untuk mengembangkan bahan cangkok tulang yang ideal dalam teknik rekayasa jaringan.

Bubuk kitosan dilarutkan dalam 5 ml asam asetat 2% pada suhu kamar, dikocok selama 15 menit, kemudian dinetralkan dengan 15 ml 0,1 M NaOH solusi Setelah sentrifugasi Pada 1500 rpm selama 10 menit, gel kitosan dimasukkan ke dalam cetakan. Untuk membuat campuran karbonit apatit dan chitosan scaffolds (CA-ChSs), dipilih chitosan scaffolds yang mengandung 200 mg bubuk kitosan. Setelah netralisasi, 50, 100, 200 dan 300 mg 0,06 M CA ditambahkan ke gel kitosan yang mengandung 200 mg bubuk kitosan.

Ketika proses pembuatan karbonit apatit dan chitosan scaffolds, larutan asam asetat digunakan untuk melarutkan bubuk kitosan dan kemudian dinetralkan dengan larutan NaOH. Untuk menghilangkan garam basa, ion atau beberapa zat beracun dalam campuran karbonit apatit dan chitosan scaffolds, dilakukan desalinasi. Selanjutnya, radiasi ultraviolet pada campuran tersebut selama 2 jam. Sampel siap diuji dalam kultur sel.

Perancah dipilih secara acak dan foto makroskopis perancah diambil menggunakan kamera digital. Struktur mikroskopis dan perancah porositas diamati menggunakan scanning mikroskop elektron.

Uji kuat tekan dilakukan dengan menggunakan sampel campuran bahan aktif yang miring yang bagian atasnya dan bagian bawahnya dihaluskan dengan amplas, sisi sampel diukur menggunakan rentang geser. Sampel ditempatkan pada unit kompresi mesin press, kemudian mesin dihidupkan dan atur kecepatan dan gaya yang akan diukur. Load cell perlahan diturunkan kemudian berhenti dan dicatat jumlah gaya yang diperoleh.

Culture mesenchymal stem cell dalam bentuk sel-line yang ditanam di piringan. Setelah pertemuan, biakan dipanen menggunakan larutan trypsine versene. Media diganti setiap 3-4 hari dan dilakukan sub kultur setiap 7 hari. Kemudian sel dipindahkan dalam botol kecil dan dibuat dengan kepadatan 2 x 104 sel / ml, sel siap digunakan untuk pengujian sampel.

Tes ini dilakukan sesuai dengan standar protokol yang direkomendasikan untuk esai MTT. Proliferasi sel dalam scaffolds diperiksa menggunakan esai MTT. Suspensi sel 20 μl dengan kerapatan 2 x 104 sel ditambahkan ke bahan aktif ditempatkan dalam piring kultur jaringan 24-sumur. Setelah 2 jam, 980 μl DMEM ditambahkan ke masing-masing sumur. Kemudian sel-sel diinkubasi dalam inkubator (CO2 5% pada 37 ° C).

Pada pengamatan hari 1, 3, 5 dan 7, chitosan scaffolds dan campuran carbonic apatite – chitosan scaffolds dicuci menggunakan PBS, diinkubasi selama 2 jam dalam 500 μl kultur sedang yang mengandung 50 μl reagen MTT, sumur dimasukkan ke dalam inkubator (CO2 5% pada 37oC). Supernatan media (110 μl) ditransfer ke piring kultur 96-baik dan absorbansi diukur menggunakan pembaca lempeng mikro dengan panjang gelombang 450 nm. Hasil yang diperoleh dinyatakan dalam kepadatan optik (penyerap). Penyerap besar dari setiap sumur menunjukkan jumlah proliferasi sel dalam kultur media.

Dari penelitian ini dapat disimpulkan bahwa 200 mg carbonic-apatite adalah jumlah paling efektif untuk dikombinasikan dengan chitosan scaffolds untuk menghasilkan perancah yang sangat baik pada sudut pandang struktur tiga dimensi dengan pori-pori kecil. Campuran carbonic-apatite dan chitosan scaffolds yang dikembangkan dari 200 mg kitosan ditambah 50 mg bubuk CA menunjukkan kemampuan tertinggi proliferasi sel di antara kelompok.

Penulis: Aqsa Sjuhada Oki, drg, MKes dan Maretaningtias Dwi Ariani Jurnal