Teknik isolasi dan pemisahan sel yang paling banyak digunakan dapat diklasifikasikan secara luas berdasarkan perlekatan, morfologi (densitas/ukuran) dan ikatan antibodi. Metode isolasi sel tunggal presisi tinggi biasanya didasarkan pada satu atau lebih dari sifat-sifat ini sementara teknik yang lebih baru menggabungkan mikofluida memanfaatkan beberapa karakteristik seluler tambahan. Kemajuan terbaru dalam prosedur isolasi sel, kemurnian, hasil dan viabilitas sel telah menghasilkan kemajuan yang signifikan di bidang biologi sel punca, onkologi dan kedokteran regeneratif.
Prosedur isolasi sel dapat berupa seleksi positif atau seleksi negatif yang pertama bertujuan untuk mengisolasi jenis sel target dari seluruh populasi, biasanya dengan antibodi spesifik sedangkan strategi yang terakhir melibatkan penipisan semua jenis sel dari populasi sehingga hanya menghasilkan sisa. sel sasaran. Kedua jenis metode isolasi tersebut memiliki kelebihan dan kekurangan. Karena penggunaan antibodi spesifik yang menargetkan tipe sel tertentu, seleksi positif menghasilkan kemurnian yang lebih tinggi dari populasi yang diinginkan. Di sisi lain, lebih rumit untuk merancang antibodi untuk menghabiskan semua sel non-target sehingga membuat seleksi negatif menjadi kurang efisien. Lebih lanjut, populasi sel yang diisolasi dengan seleksi positif dapat dimurnikan secara berurutan melalui beberapa siklus prosedur, suatu keuntungan yang tidak dapat diberikan oleh selektif negatif. Namun, sel-sel yang dipilih secara positif membawa antibodi dan agen pelabelan lain yang dapat mengganggu kultur dan pengujian hilir – jika itu menjadi perhatian, lebih baik menggunakan seleksi negatif.
Mengisolasi jenis sel tertentu dari populasi heterogen tergantung pada sifat unik dari jenis sel itu. Dalam ulasan ini, kami membahas empat kategori luas teknik isolasi sel berdasarkan karakteristik seluler berikut. Muatan dan adhesi permukaan menentukan tingkat perlekatan sel pada permukaan plastik dan polimer lainnya dan dapat digunakan untuk memisahkan sel-sel yang melekat dari sel yang tersuspensi/mengambang bebas. Ukuran dan kepadatan sel – Sifat fisik ukuran dan kepadatan biasanya digunakan untuk pemulihan massal sel; baik dengan sedimentasi, filtrasi atau sentrifugasi gradien densitas.
Jenis sel yang berbeda dapat dibedakan berdasarkan bentuknya, pewarnaan histologis, pertumbuhan selektif media, potensi redoks dan sifat visual dan perilaku lainnya yang kemudian dapat digunakan untuk mengisolasi sel. Penanda permukaan, pengikatan spesifik antigen permukaan ke antibodi atau aptamers dapat secara selektif menangkap sel fenotipe permukaan spesifik. Sel-sel yang ditangkap kemudian dideteksi dengan bantuan probe yang dapat diskalakan – biasanya fluorokrom dan partikel magnetik yang diberi label antibodi. Selain itu, dua atau lebih prinsip di atas dapat digabungkan untuk lebih meningkatkan spesifisitas sel terisolasi – biasanya, teknik senyawa terdiri dari metode bebas label (tiga pertama dalam daftar) bersama dengan metode penggabungan label.
Aplikasi sentrifugasi gradien densitas yang paling umum adalah fraksinasi darah. Oleh karena itu protokol umum untuk fraksinasi darah menggunakan Ficoll, pertama-tama kumpulkan darah/buffy coat dalam tabung berlapis anti-koagulan dan encerkan dengan volume PBS yang sama. Keluarkan volume Ficoll yang sesuai ke dalam tabung sentrifus dan lapisi dengan hati-hati darah yang telah diencerkan di atas media gradien. Jangan biarkan darah dan Ficoll bercampur. Centrifuge pada 400-500 x g selama 30-40 menit pada suhu kamar dengan rem centrifuge mati. Aspirasi fraksi sel yang diinginkan : lapisan atas plasma → trombosit; plasma dan antarmuka Ficoll → sel mononuklear; lapisan di bawah Ficoll → granulosit; pelet → sel darah merah. Cuci sel dengan PBS beberapa kali untuk menghilangkan plasma dan Ficoll sebelum menggunakan sel untuk analisis lebih lanjut.
Aplikasi sentrifugasi gradien densitas yang paling umum adalah fraksinasi darah. Oleh karena itu protokol umum untuk fraksinasi darah menggunakan Ficoll, pertama-tama kumpulkan darah/buffy coat dalam tabung berlapis anti-koagulan dan encerkan dengan volume PBS yang sama. Keluarkan volume Ficoll yang sesuai ke dalam tabung sentrifus dan lapisi dengan hati-hati darah yang telah diencerkan di atas media gradien.
Penulis: Nanda Rachmad Putra Gofur
Informasi detail dari riset ini dapat dilihat pada tulisan kami di:
Nanda Rachmad Putra Gofur., Aisyah Rachmadani Putri Gofur2, Soesilaningtyas3, Rizki Nur Rachman Putra Gofur4, Mega Kahdina4 and Hernalia Martadila Putri. Application Technique in Isolation and Separating Cell for Biomedical Research: A Review Article. Cancer Med J 5(2): 78-83.
